Análisis de transferencia horizontal de genes en ensayos de biorremediación con grasas recalcitrantes / Analysing horizontal gene transfer in bioremediation trials using recalcitrant grease

El empleo de microorganismos como herramienta para la mineralización de contaminantes orgánicos es una práctica que ha tomado mucha fuerza gracias a su eficiencia y bajo costo. La transferencia horizontal vía conjugación de genes es un requerimiento básico para optimizar procesos de biorremediación, por esta razón, además de conocer la diversidad metabólica es fundamental entender las interacciones que ocurren en una comunidad bacteriana para potenciar los procesos de biorremediación en campo.En este estudio se busca evaluar el potencial de transferencia horizontal (TH), tanto in vitro como en microcosmos de suelo, de aislamientos de bacterias obtenidas de un pasivo ambiental de grasas provenientes de la explotación carbonífera del Cerrejón. Inicialmente se agruparon los aislamientos de acuerdo con sus patrones de resistencia a antibióticos: ampicilina, cloramfenicol, gentamicina, tetraciclina y kanamicina. El potencial de TH de las cepas Vlf4, Ot3, Ot6, Pgt4, Blf11 y Vlf13 fue evaluado in vitro en medio sólido Luria-Bertani (LB) donde se obtuvieron nuevos fenotipos a partir de los cruces Vlf13xOt6 y Pgt4xOt6, el nuevo fenotipo indica resistencia a los dos marcadores (ampR, kanR) y su morfología sugiere que el receptor, en los dos casos, es la cepa Ot6. Los parentales Vlf13, Pgt4 y Ot6 fueron identificados por amplificación del gen RNAr 16S como Pseudomonas sp., Pseudomonas sp. y Chryseobacterium sp., respectivamente, y los transconjugantes como Chryseobacterium sp. Posteriormente, estos dos cruces fueron sometidos a ensayos de transferencia horizontal en microcosmos de suelos, donde se hizo evidente nuevamente la presencia de TH a una menor tasa. Los resultados obtenidos indican la posibilidad de un potencial de transferencia horizontal de genes entre los aislamientos seleccionados, dando lugar a la probabilidad de formular en futuros estudios un consorcio de bacterias que demuestran tener esta ventaja adaptativa.

The use of microorganisms as a tool for the mineralization of organic pollutants is a practice that has begun to gain strength due to its efficiency and low cost. Horizontal gene transfer by conjugation is important for the optimization of bioremediation processes. For this reason it is fundamental to study the metabolic diversity of catabolic pathways, but we must also understand the microbial interactions occurring in bioremediation consortia. This will help us improve bioremediation in field.The purpose of this study was to evaluate the horizontal gene transfer (HGT) potential, in vitro and in soil microcosms, of bacterial strains isolated from grease samples obtained from a disposal site situated in the coal mine “Cerrejon”. Initially the isolates were grouped by selective markers: Ampicillin, chloramphenicol, gentamicin, tetracycline and kanamycin. The HGT potential of strains: Vlf4, Ot3, Ot6, Pgt4, Blf11 y Vlf13 was evaluated in vitro on Luria-Bertani LB agar. New phenotypes were obtained from matings between Vlf13xOt6 and Pgt4xOt6. The new phenotype indicates resistances to both antibiotic markers and its morphology suggests that isolate Ogt6 is the receptor in both cases. The parental strains Vlf13, Pgt4 and Ot6 were identified by RNAr 16S as Pseudomonas sp. Pseudomonas sp. and Chryseobacterium sp. respectively and the transconjugants as Chryseobacterium sp. Subsequently soil microcosms were conducted with Vlf13xOt6 and Pgt4xOt6 and new phenotypes were detected at a lower rate again but with the same possible receptor but. These results suggest the possibility of horizontal gene transfer potential within the selected isolates, giving the possibility of formulating, in future studies, a bacterial consortium with an adaptive advantage.

Efecto lipolítico del Resveratrol en células 3T3-L1 / Lipolitic effect of Resveratrol in cells 3T3-L1

Introducción: La obesidad es uno de los mayores factores de riesgo para la resistencia a la insulina y la aparición de la diabetes tipo 2. Las proteínas Sirtruinas, entre ellas la Sirtruina 1 (Sirt 1), tiene la capacidad de inhibir la expresión de los genes controlados por el receptor nuclear PPARy promoviendo la movilización de los ácidos grasos desde el adipocito y evitando su almacenamiento. Objetivo: El propósito de este trabajo es evaluar la capacidad del Resveratrol como agente lipolítico en células adiposas diferenciadas. Materiales y métodos: La adipogénesis se realizó mediante la incubación preadipocitos de ratón de la línea celular 3T3.-L1 en presencia de un cóctel de diferenciación con Rosiglitazona, Isobutil Xantina y Dexametasona, y se llevaron a cabo observaciones cada dos días en el período comprendido entre los 0 y 10 días. Posteriormente, se aplicaron dosis de Rosiglitazona y Resveratrol y se realizaron nuevas observaciones hasta el día 6 para corroborar el efecto del Resveratrol. Resultados y discusión: Los resultados obtenidos nos permitieron observar el efecto lipolítico del Resveratrol sobre las células adiposas dado que la cantidad de triglicéridos dentro de las mismas fue menor con respecto a las células diferenciadas y que no fueron tratadas con éste. Esto puede ser causado por la capacidad del Resveratrol de estimular la actividad de la Sirt 1 que a su vez provoca la inhibición del PPARy. Conclusiones: Estos trabajos nos permitirán en el futuro desarrollar nuevas intervenciones en el tratamiento de la obesidad y sus complicaciones...

Introduction: The obesity it is one of the main risk factor for develop insulin resistance and type 2 diabetes, one component of calorie restriction in mammals it is given by Sirtuins proteins among them (SIRT 1), which have the capacity of inhibit the expression of the genes control by the nuclear receptor PPARy, promoting the mobilization of the fatty acids from the adipocyte and avoiding their storage. Objective: The purpose of this work is to evaluate the capacity of Resveratrol (flavonoid found in grape skin) as a lipolytic agent on adipose cells differentiated by Rosiglitazone. Materials and methods: Fibroblast preadipocyte adipogenesis was carried out using Rosiglitazona, incubating murine 3T3-L1 cells in the presence of a differentiation cocktail of Rosiglitazone, Isobutil Xantine and Dexametasone, monitoring between days 0 to 10 of differentiation every two days. Subsequently doses of Resveratrol and Rosiglitazone were added to each cells culture and followed up until day 6, to make sure the Resveratrol effect. The triglycerides quantification was performed qualitatively by red oil stain and quantitatively by isopropanol extraction and absorbance measurement at 510 nm.Results and analysis: The results allowed us to see the Resveratrol lipolytic effect on the adipocyte cells, because the amount of triglycerides was lower than the cultures differentiated by Rosiglitazone. This could be caused by the Resveratrol capacity of stimulate the SIRT 1 activity, which also inhibit PPARy. Conclusions: This kind of work will help in develop new interventions in the treatment of the obesity and complications...